细胞培养室无菌建设及注意事项如下：
一、无菌室建设
- 结构与布局：
- 细胞培养室应包含更衣间、缓冲间和无菌操作间三个主要部分。
- 更衣间：供实验人员更换衣服、鞋子及穿戴帽子、口罩和手套。
- 缓冲间：位于更衣间与无菌操作间之间，用于放置恒温培养箱及某些小型仪器，同时确保无菌操作间的无菌环境。
- 无菌操作间：专用于无菌操作和细胞培养。其大小应适当，顶部高度不超过2.5米，以保证紫外线的灭菌效果。墙壁应光滑无死角，便于清洁和消毒。
- 设备与设施：
- 洁净工作台（超净台）：是细胞培养中必不可少的设备，利用空气层流装置排除工作台面上的尘埃和微生物。主要有侧流式（垂直式）和外流式（水平层流式）两种。
- CO₂培养箱：为细胞提供一个体外培养的舒适环境，如适宜的温度、CO₂浓度和湿度等。
- 显微镜：用于观察细胞的生长情况和污染状况。
- 其他：还包括超纯水机、单细胞悬液制备仪等设备。
二、注意事项
- 无菌操作：
- 实验人员进入无菌室前，应先关掉紫外灯，至少等待15分钟后再进入。
- 进入无菌室前，需用肥皂或消毒液洗手消毒，并在缓冲间更换专用工作服、鞋、帽子、口罩和手套。
- 实验过程中，应定期用消毒剂擦拭台面及操作台上的物品，保持工作区域的清洁和无菌。
- 材料准备：
- 使用无菌的哺乳牛血清，并在低温下储存。
- 使用新的、未污染的塑料制品和玻璃仪器。
- 准备足够的消毒剂，如70%的乙醇、有效次氯酸钠等，并正确配制和使用。
- 通风与清洁：
- 实验室应有良好的通风系统，确保空气流通和减少污染。
- 定期清洁和消毒实验室环境，包括地面、墙壁、工作台等。
- 储藏与消毒：
- 无菌物品应保存在无菌包或灭菌容器内，并按消毒日期顺序放置在固定的柜橱内。
- CO₂培养箱等设备应定期检查、清洗和消毒，以确保其无菌状态。
- 个人防护：
- 实验人员应穿戴适当的个人防护装备，如手套、口罩等，以防止细菌或病毒的感染。
综上所述，细胞培养室的无菌建设及注意事项涉及多个方面，包括无菌室的结构与布局、设备与设施、无菌操作、材料准备、通风与清洁、储藏与消毒以及个人防护等。严格遵守这些要求和注意事项，可以确保细胞培养过程中的无菌环境，保障实验结果的准确性和可靠性。
